【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:同型半胱氨酸測定試劑盒(酶法)
【包裝規(guī)格】
試劑1(R1):1×32ml;試劑2(R2):1×10.5ml;
試劑1(R1):2×20ml;試劑2(R2):1×13ml;
試劑1(R1):2×32ml;試劑2(R2):2×10.5ml;
4x60T:(R1:16×3.8ml; R2:8×2.2ml);
8x60T:(R1:32×3.8ml; R2:16×2.2ml)。
【預(yù)期用途】
供醫(yī)療機構(gòu)用于人血清中同型半胱氨酸濃度的體外檢測,用于輔助診斷。
【檢驗原理】
利用小分子捕獲技術(shù)(SMT)的S-腺苷Hcy(SAH)水解酶的方法,在三-乙-羧乙基膦(TCEP)作用下,氧化型Hcy被轉(zhuǎn)化為游離型Hcy,后者通過與共價底物S-腺苷甲硫氨酸反應(yīng),生成蛋氨酸和SAH。SAH被SAH水解酶水解成腺苷和Hcy,Hcy經(jīng)循環(huán)反應(yīng)放大信號,同時產(chǎn)生腺苷,腺苷立即水解成氨和次黃嘌呤,氨在谷氨酸脫氫酶的作用下,使NADH轉(zhuǎn)化為NAD+,樣本中的Hcy含量與NADH轉(zhuǎn)化速率呈正比。
【主要組成成分】
試劑1:
S-腺苷甲硫氨酸(SAM) 0.1mM
NADH > 0.2 mM
TCEP(磷酸三氯乙酯) > 0.5 mM
2-酮戊二酸 5.0 mM
試劑2:
谷氨酸脫氫酶 10KU/L
SAH水解酶 3.0 KU/L
腺苷脫氨酶 5.0 KU/L
Hcy 甲基轉(zhuǎn)移酶 5.0 KU/L
不同批次試劑不得混用。
【儲存條件及有效期】
試劑盒自生產(chǎn)之日起避光、密閉儲存于2-8oC,有效期為12個月。保存在生化儀上的開瓶試劑可以穩(wěn)定保存30天。
生產(chǎn)日期及有效期見標(biāo)簽。
【適用儀器】
本產(chǎn)品主要適用于下列開放式全自動生化分析儀。建議用戶在下列儀器上使用本產(chǎn)品前,根據(jù)實驗室情況進(jìn)行驗證。
(1)HITACHI 7060、7080、7180、7600型號的開放式全自動生化分析儀
(2)OLYMPUS AU 400、AU640、AU2700、AU5400型號的開放式全自動生化分析儀
(3)Abbott C8000型號的開放式全自動生化分析儀
(4)Roche Modular P800型號的開放式全自動生化分析儀
(5)BECKMAN DXC800型號的開放式全自動生化分析儀
(6)邁瑞400,800型號的開放式全自動生化分析儀
(7)西門子RXL-MAX型號的全自動生化分析儀
(8)東芝120型號的開放式全自動生化分析儀
(9)東軟400型號的開放式全自動生化分析儀
(10)Bayer ADVIA 1650/2400型號的開放式全自動生化分析儀
【樣本要求】
新鮮的血清,樣本收集之后要立即離心分離血清;假如不能立即離心,收集好的樣本應(yīng)該放在冰箱中保存,并且在一個小時內(nèi)離心。溶血、混濁和脂血的樣本不建議使用。經(jīng)過分離的血清樣本在室溫可以保存4天,在0-8℃能保存幾周,在-20℃能保存幾個月。
【檢驗方法】
1.試驗條件:主波長340nm,比色杯光徑1.0cm,溫度37℃。
2.試驗方法:
空白 | 校準(zhǔn)品 | 樣本 | |
試劑1 | 240 | 240 | 240 |
空白(μl) | 13 | ||
校準(zhǔn)品(μl) | |||
樣本(μl) | |||
37℃溫浴5min | |||
R2(μl) | 65 | 65 | 65 |
37℃溫浴2.5 min,讀取吸光度A1 | |||
37℃溫浴2.5 min,讀取吸光度A2 |
△A=[(A2-A1)校準(zhǔn)品管或樣品管]-[(A2-A1)空白管]
以日立7060全自動生化儀為例,參數(shù)設(shè)置如下:
溫度 | 37℃ | 反應(yīng)方法 | 兩點速率法 |
副波長/主波長 |
700nm/340nm |
R1/s/R2 |
240μl/13μl /65μl |
擬合方式 | Spline | 反應(yīng)方向 | 下降 |
A1測光點 |
24 | A2測光點 | 31 |
3. 校準(zhǔn)及質(zhì)量控制程序:
在對樣本進(jìn)行檢測時須使用商品化的、具有溯源性的校準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)后,再對商品化的、具有溯源性的質(zhì)控品進(jìn)行檢測,其檢測結(jié)果必須在允許范圍內(nèi),才能對樣本進(jìn)行檢測。
4. 試驗結(jié)果的計算方法:
以同型半胱氨酸校準(zhǔn)品的標(biāo)示濃度為橫坐標(biāo)(X),以同型半胱氨酸校準(zhǔn)品的實際測定吸光度值(ΔA)為縱坐標(biāo)(y),進(jìn)行非線性擬合,如spline、logit等,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,將待測樣本的測定吸光度值(ΔA)代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可得出相應(yīng)待測樣本同型半胱氨酸(Hcy)的濃度(μmol/L)。
【參考區(qū)間】
參考范圍是≤15μmol/L,建議各實驗室確立所服務(wù)人群的參考范圍。
【檢驗結(jié)果的解釋】
樣本中血紅蛋白≤1200mg/dL、膽紅素≤20mg/dL、甘油三脂≤2500mg/dL、維生素C≤10mmol/L、胱硫醚≤20μmol/L時對測定無干擾。
【檢驗方法的局限性】
1. 本試劑的線性范圍0~50μmol/L,當(dāng)樣本中同型半胱氨酸濃度高于50μmol/L時,應(yīng)該用水稀釋后再測定,結(jié)果乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
2. 本試劑保存于2~8oC,不可凍存。
3. 試劑應(yīng)該是清澈的,若變混濁或初始吸光度小于0.800A(340nm,光徑1.0cm)應(yīng)該丟棄。
4. S-腺苷同型半胱氨酸會引起明顯的正干擾,但正常人體血漿中含SAH的量極低,不會對測試結(jié)果造成干擾。
5. 病人可能因為攝入某些藥物引起同型半胱氨酸升高:如甲氨蝶呤、卡馬西平、苯妥英、含氮的氧化物,抗驚厥劑等。
6. 不能檢測含有3-偶氮腺苷的樣本。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1外觀:在自然光條件下進(jìn)行目視檢測,產(chǎn)品主要原材料的外觀要求如下:
試劑1:無色澄清液體;
試劑2:無色至淡黃色澄清液體;
2 凈含量:≥標(biāo)示量。
3試劑空白吸光度(340nm、37℃&1.0cm光徑):≥0.800A。
4分析靈敏度:試劑測試10μmol/L的同型半胱氨酸樣本時,吸光度差值ΔA≥0.01A
5線性:線性在0~50μmol/L范圍內(nèi):
a)線性相關(guān)系數(shù)(r)≥0.995;
b) 線性偏差不超過±10%,絕對偏差應(yīng)不超過±1.0μmol/L(零點計算用)。
6精密度:
6.1重復(fù)性CV≤5.0%(樣本濃度為10.0±2.0μmol/L),CV≤3.0%(樣本濃度為20.0±4.0μmol/L);
6.2批間相對極差≤10%(樣本濃度為10.0±2.0μmol/L)。
7準(zhǔn)確度:測試可用于評價常規(guī)方法的參考物質(zhì),結(jié)果與標(biāo)示值的相對偏差應(yīng)不超過±15%。
8穩(wěn)定性:試劑盒自生產(chǎn)之日起避光,密閉儲存于2~8℃,可穩(wěn)定12個月。
【注意事項】
1. 本試劑盒僅供體外診斷使用。
2. 不同批號的試劑不得混用。
3. 試劑中含有防腐劑疊氮化鈉,請勿直接接觸皮膚、眼睛。一旦接觸,即用大量清水沖洗。請勿吞服。
4. 試劑盒的測定結(jié)果僅作為各種疾病的臨床輔助診斷依據(jù)。
5. 試劑和樣本的用量可根據(jù)儀器的不同比例改變。
6. 校準(zhǔn)品雖然對其潛在的危險已經(jīng)處理過,但仍需按照人源樣本對待。
7. 校準(zhǔn)品中含有甘油,全自動分析儀要按照日常清洗程序進(jìn)行清洗,以免試劑覆蓋在試劑針上。
【參考文獻(xiàn)】
1《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》(試行)
2《臨床實驗室參考范圍的定義和確定》
3 2006年東南大學(xué)出版社出版的《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第三版
4《臨床化學(xué)體外診斷試劑(盒)通用技術(shù)要求》