【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：乙型肝炎病毒表面抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【包裝規(guī)格】
48人份/盒、96人份/盒、576人份/盒
【預(yù)期用途】
適用于定性測(cè)定人血清或血漿中乙型肝炎病毒表面抗體。
可用于判斷乙型肝炎疫苗接種效果和乙型肝炎病毒感染的治療效果及預(yù)后情況。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用EIA雙抗原夾心法檢測(cè)人血清或血漿中的乙肝表面抗體（抗-HBs），采用乙肝表面抗原（HBsAg）包被反應(yīng)板，加入待測(cè)標(biāo)本，同時(shí)加入HBsAg-HRP，進(jìn)行孵育，當(dāng)標(biāo)本中存在乙肝表面抗體（抗-HBs）時(shí)，該抗體與包被乙肝表面抗原結(jié)合并與酶結(jié)合物形成HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP復(fù)合物，洗去游離反應(yīng)物，加入顯色劑后，將有明顯顏色變化；當(dāng)標(biāo)本中沒有乙肝表面抗體（抗-HBs）時(shí)，加入底物后沒有或只有很輕微的顏色變化。
【主要組成成分】
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試劑盒組成 |
48人份/盒 |
96人份/盒 |
576人份/盒 |
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1.預(yù)包被反應(yīng)板 |
48孔/塊×1塊 |
96孔/塊×1塊 |
96孔/塊×6塊 |
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2.酶結(jié)合物 |
3mL×1瓶 |
6mL×1瓶 |
40mL×1瓶 |
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3.陽性對(duì)照 |
0.5mL×1瓶 |
0.5mL×1瓶 |
2mL×1瓶 |
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4.陰性對(duì)照 |
0.5mL×1瓶 |
0.5mL×1瓶 |
2mL×1瓶 |
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5.濃縮洗滌液 |
30mL×1瓶 |
30mL×1瓶 |
100mL×2瓶 |
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6.顯色劑A |
3mL×1瓶 |
6mL×1瓶 |
40mL×1瓶 |
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7.顯色劑B |
3mL×1瓶 |
6mL×1瓶 |
40mL×1瓶 |
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8.終止液（2MH2SO4） |
3mL×1瓶 |
6mL×1瓶 |
40mL×1瓶 |
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9.封板膠紙 |
1片 |
1片 |
6片 |
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10.自封袋 |
1只 |
1只 |
6只 |
注意：不同批號(hào)試劑盒中試劑盒組成1、2 不可混用。
各組份組成：
酶結(jié)合物：Na2HPO4·12H2O 6.7g/L；NaH2PO4·2H2O 0.16g/L；KCl 0.2g/L；NaCl 16.4g/L；固體A（酶保護(hù)劑）0.6g/L；Tris Base 7.4g/L；牛血清白蛋白100g/L；液體A（液體防腐劑）7mL/L；山羊血清 100mL/L；指示劑1 1.25mL/L；HBsAg-HRP 適量。
陽性對(duì)照：Na2HPO4·12H2O 2.9g/L；NaCl 8g/L；KCl 0.2g/L；KH2PO4 0.2g/L； 硫柳汞 2g/L；乙二醇 200mL/L；小牛血清 200mL/L；指示劑1 1.25mL/L；陽性血清適量。
陰性對(duì)照：Na2HPO4·12H2O 2.9g/L；NaCl 8g/L；KCl 0.2g/L；KH2PO4 0.2g/L；NaN3 150g/L；指示劑2 0.55mL/L；陰性血清 300mL/L。
濃縮洗滌液： Na2HPO4·12H2O 58g/L； NaCl 160g/L；KCl 4g/L；KH2PO4 4g/L；Tween-20 10mL/L。
顯色劑A：檸檬酸 8g/L；試劑A 0.004g/L；試劑B 2.4mL/L；過氧化尿素 0.7g/L。
顯色劑B：檸檬酸 2.1g/L；乙二胺四乙酸二鈉 0.38g/L；TMB 0.4g/L 。
終止液： 2M H2SO4 。
需要但未提供的物品：
1. 新鮮的蒸餾水或去離子水
2. 一次性手套
3. 精確的微量移液器和潔凈的吸頭
4. 干凈的吸水紙
5. 37℃恒溫箱或水浴鍋
6. 計(jì)時(shí)器
7. 洗板機(jī)或洗瓶機(jī)
8. 振蕩器
【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑盒應(yīng)置2～8℃中避光保存，有效期12個(gè)月。
生產(chǎn)日期及有效期見標(biāo)簽。
【適用儀器】
酶標(biāo)儀 檢測(cè)波長(zhǎng)450nm，參考波長(zhǎng)630nm
【樣本要求】
1. 樣本采集不需要特殊準(zhǔn)備，不需要受檢者禁食，按照正常的采血技術(shù)收集血液，全血樣品最好先放置37℃處理2小時(shí)，再將血樣品充分離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（漿）不含或極少含血細(xì)胞。如果為抗凝血樣品，應(yīng)將血樣品充分離心后，最好再放置室溫2小時(shí)以上。
2. 樣本可使用血清或血漿，檸檬酸、肝素或EDTA等抗凝劑不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3. 樣本中含用疊氮鈉會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，高度溶血的樣本、沒完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會(huì)引起錯(cuò)誤的結(jié)果。
4. 新鮮的樣本在2～8℃無菌條件下可保存一星期，新鮮樣本可長(zhǎng)期貯存在-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。
【檢驗(yàn)方法】
1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將濃縮洗滌液作1：20稀釋。
2. 加待測(cè)標(biāo)本：加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05毫升，并設(shè)陽性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照2孔，均0.05毫升，空白對(duì)照1孔。
3. 加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升，空白對(duì)照孔不加，充分混勻，貼上膠紙，置37℃孵育30分鐘。
4. 洗板：1）手工洗板：棄去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置5～10秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復(fù)5次，拍干。
2）洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，洗液應(yīng)注滿每孔，并確保每次吸凈無殘留，最后在吸水紙上拍干。
5. 加顯色劑： 先加顯色劑A，每孔0.05毫升； 再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37℃避光孵育15分鐘。
6. 終止反應(yīng)： 每孔加入終止液0.05毫升，混勻。
7.測(cè)定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇單波長(zhǎng)450 nm（以空白孔校零）或雙波長(zhǎng)450/630 nm，讀取各孔OD值。讀數(shù)須在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
【陽性判斷值】
Cutoff 值計(jì)算： COV = 陰性對(duì)照平均OD值×2.1
標(biāo)本OD值≥COV為陽性，標(biāo)本OD值＜COV為陰性
注：陰性對(duì)照OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1. 陰性結(jié)果表明樣本中不含乙肝表面抗體（抗-HBs），或樣本中的乙肝表面抗體（抗-HBs）含量低于試劑盒的檢測(cè)范圍。
2. 陽性結(jié)果表明樣本中含有乙肝表面抗體（抗-HBs），或非特異反應(yīng)因素。
3. 陽性結(jié)果的樣本需要再進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，只有經(jīng)過重復(fù)或再重復(fù)實(shí)驗(yàn)仍為陽性結(jié)果的樣本，可認(rèn)為是乙肝表面抗體（抗-HBs）陽性。所有重復(fù)結(jié)果為陽性的樣本應(yīng)經(jīng)過適當(dāng)?shù)氖侄芜M(jìn)行確認(rèn)。
陽性結(jié)果的樣本如復(fù)檢為陰性結(jié)果應(yīng)被認(rèn)為是陰性樣本，重復(fù)不出陽性結(jié)果可能屬于下列一個(gè)或多個(gè)技術(shù)問題引致：
1） 由于儀器或加樣器造成的交叉污染。
2） 顯色劑被金屬離子污染。
3） 由于試劑滴漏造成的交叉污染。
4） 不充分的洗板或最后吸去不徹底。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
所有高敏感性的免疫實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)都存在潛在的非特異性反應(yīng)，所以重復(fù)的陽性結(jié)果應(yīng)以一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行確認(rèn)。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1 試劑外觀為澄清透明液體，無絮狀沉淀物。
2 陰性參考品符合率：20份陰性參考品檢測(cè)不得出現(xiàn)假陽性。
3最低檢出量：應(yīng)不高于10mIU/mL。
4 精密性：用精密性參考品測(cè)定，CV（％）應(yīng)不高于15％（n=10）。
5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：試劑各組分置37℃至少6天，檢定結(jié)果應(yīng)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)1～4。
6 裝量：≥標(biāo)示裝量。
【注意事項(xiàng)】
1. 本品僅用于體外診斷，僅限檢測(cè)人體血清、血漿；檢測(cè)結(jié)果作為診斷指標(biāo)之一。
2. 從2～8℃條件下取出的樣本應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行檢測(cè)。
3. 須確保樣品加樣量的準(zhǔn)確，如果加樣不準(zhǔn)確，可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 使用微量移液器手工加樣時(shí)，每次應(yīng)該更換吸頭吸取樣本。
5. 用滴瓶滴加時(shí)，請(qǐng)將甁中液體搖勻，并棄去1～2滴后垂直勻速地滴加。要避免將組份中的液體觸到或?yàn)R到微孔邊緣上，特別是酶結(jié)合物。
6. 在操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。
7. 濃縮洗滌液系高濃度磷酸鹽，可能會(huì)形成結(jié)晶，如未完全溶解，會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)可能會(huì)堵住自動(dòng)加樣器或洗板機(jī)管道。若出現(xiàn)結(jié)晶，請(qǐng)放置37℃充分溶解，然后稀釋混勻使用。
8. 封板膠紙不能重復(fù)使用。
9. 用水浴鍋反應(yīng)時(shí)，請(qǐng)將反應(yīng)板浸放于水中1/3，底部以網(wǎng)格支撐物支撐，水溫控制在37℃。
10. 洗板：1）以洗板機(jī)洗板時(shí)，洗板機(jī)的加液量至關(guān)重要，既避免洗液過量溢出，又能充滿反應(yīng)微孔中，洗板次數(shù)不應(yīng)少于5次，并經(jīng)常注意檢查加液頭是否堵塞。
2）手工洗板時(shí)，請(qǐng)勿使用帶紙屑的吸水材料拍板，以防外源性過氧化物酶類似物或氧化還原物質(zhì)與顯色劑發(fā)生反應(yīng)，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3）洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。
4）洗板機(jī)最好在每次使用前、后，用蒸餾水或去離子水清洗干凈，以防止管路堵塞或腐蝕。
11. 如果用任何試劑接觸皮膚和眼睛，必須用大量清水對(duì)該部位進(jìn)行擴(kuò)大清洗和消毒；終止液為硫酸，具有腐蝕性。
12. 試劑盒內(nèi)有關(guān)組份及臨床樣本均應(yīng)視為有潛在傳染性，請(qǐng)按相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范來執(zhí)行和處理。
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